痰瘀同治方调控PPARγ/NF-κB通路对大鼠动脉粥样硬化斑块内血管新生的影响

目的观察痰瘀同治方对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块内血管新生的抑制作用,探讨PPARγ/NF-κB信号通路在其过程中的调控机制。方法 50只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、罗格列酮组、痰瘀同治低剂量组(TYTZ低组)和痰瘀同治高剂量组(TYTZ高组),每组10只。空白对照组始终喂基础饲料,其余4组采用高脂喂养+维生素D3负荷+球囊损伤动脉内膜建立AS大鼠模型。空白对照组和模型组大鼠每天予生理盐水4 mL灌胃,罗格列酮组大鼠予罗格列酮3 mg/(kg·d)灌胃,TYTZ低组和TYTZ高组大鼠分别予痰瘀同治方生药7.5、30 g/(kg·d)灌胃,各组均持续给药6周。检测各组大鼠血脂(TC、TG、LDL-C)、炎性因子[C反应蛋白(CRP)、IL-1、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)]水平;免疫组化CD31染色观察新生血管密度;Western blot法检测主动脉内PPARγ及NF-κB蛋白表达,并对各组PPARγ与NF-κB蛋白表达水平进行相关性分析。结果 (1)与空白对照组比较,模型组TC、CRP、IL-1和MCP-1水平均升高(P0.05);与模型组比较,TYTZ高组TC和LDL-C水平降低(P0.05),罗格列酮组TC和TG水平降低(P0.05),TYTZ高组和罗格列酮组CRP、IL-1和MCP-1水平均降低(P0.05)。(2)CD31染色结果显示:与空白对照组比较,模型组的新生血管表达最丰富(P0.05);与模型组比较,各药物干预组的新生血管密度均下降(P0.05)。(3)与空白对照组比较,模型组PPARγ蛋白表达水平降低(P0.05),NF-κB蛋白表达水平升高(P0.05);与模型组比较,罗格列酮组、TYTZ高和TYTZ低组PPARγ蛋白表达水平均升高(P0.05),NF-κB蛋白表达水平均降低(P0.05)。各组大鼠主动脉PPARγ与NF-κB蛋白表达水平呈负相关(r=-0.635,P0.05)。结论痰瘀同治方具有降脂、抗炎和抑制AS斑块内血管新生的作用,PPARγ/NF-κB通路的激活可能是痰瘀同治方抑制斑块内血管新生的作用机制之一。     

丹蒌片及血府逐瘀颗粒抗大鼠动脉粥样硬化作用及机制研究

目的观察丹蒌片及血府逐瘀颗粒对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)模型大鼠血脂、血小板源性生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)、血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及胞外信号调控激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)信号通路的影响,探讨其抗AS的可能机制。方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、他汀组、丹蒌组、血府组,每组8只。正常组大鼠喂食基础饲料12周,余4组均采用高糖高脂饮食加维生素D3腹腔注射方法复制AS模型。模型组、他汀组、丹蒌组、血府组分别给予生理盐水、阿托伐他汀混悬液(0.18mg/mL)、丹蒌片混悬液(45mg/mL)、血府逐瘀颗粒混悬液(1g/mL)灌胃干预8周。采用ELISA法检测血清TC、TG、LDLC、HDL-C、PDGF水平,HE染色观察胸主动脉病理学改变,Western blot法检测大鼠胸主动脉血管内ERK1/2、pERK1/2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组血清TC、TG、LDL-C、PDGF,血管ERK1/2及pERK1/2蛋白表达水平升高(P0.05)。HE染色可见血管内膜明显不规则增厚,内皮下泡沫细胞聚集,脂质沉着,中膜VSMC排列紊乱,形成典型AS斑块。与模型组比较,各给药组TC、PDGF水平降低(P0.05,P0.01),他汀组及丹蒌组TG、LDL-C水平降低(P0.01,P0.05),他汀组、丹蒌组及血府组血管ERK1/2及pERK1/2蛋白表达降低(P0.01)。HE染色可见各给药组亦形成典型AS斑块,但内膜增生明显减轻,钙化灶面积明显减小。结论丹蒌片及血府逐瘀颗粒均能减小斑块面积,减轻大鼠AS病变程度,延缓AS病情进展,其作用机制可能是通过降低血清血脂水平,减少PDGF释放,抑制ERK信号通路活化及VSMC增殖。     

丹蒌片对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化的疗效研究

目的观察丹蒌片对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化（AS）的作用。方法32只雄性ApoE-/-小鼠随机分为空白组、模型组、他汀组、丹蒌组，每组8只。空白组喂饲基础饲料，余各组采用高糖高脂饲料连续喂饲12周制备AS模型。模型组、他汀组及丹蒌组于第5周时分别给予生理盐水、阿托伐他汀混悬液（1.5 mg/mL）、丹蒌片混悬液（0.34 mg/mL）连续灌胃干预8周。干预结束后，ELISA检测血清血脂、一氧化氮（NO）、内皮素（ET）及IL-6含量；油红“O”染色观察主动脉内膜斑块；HE染色观察小鼠主动脉内膜厚度及斑块面积；透射电镜观察血管平滑肌细胞（VSMC）结构。结果与空白组比较，模型组血清TC、TG、LDL-C、IL-6、ET水平、内膜厚度、面积及内/中膜厚度面积比升高（P<0.05， P<0.01），HDL-C、NO水平下降（P<0.05，P<0.01）。与模型组比较，他汀组和丹蒌组血清TC、TG、LDL-C、ET水平、内膜厚度、面积及内/中膜厚度面积比下降（P<0.05，P<0.01），NO水平升高（P<0.05，P<0.01），丹蒌组血清IL-6水平下降（P<0.01）。模型组油红“O”染色AS区域脂肪呈鲜红色，形成广泛而典型的AS成熟斑块，透射电镜下可见VSMC胞浆内有较多的吞噬大量脂质形成的空泡，细胞间胶原纤维增生明显，呈典型合成型改变，他汀组和丹蒌组AS脂肪区域面积减少，主动脉合成型VSMC减少。结论丹蒌片可显著降低血清血脂、炎症因子水平，保护血管内皮功能，抑制VSMC异常增殖，从而延缓AS的发生发展。     

丹蒌片抗动脉粥样硬化模型小鼠主动脉平滑肌细胞增殖的机制研究

目的研究丹蒌片对动脉粥样硬化(AS)模型ApoE~(-/-)小鼠血清抵抗素水平、血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响,并探讨其可能机制。方法 32只ApoE~(-/-)小鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、他汀组及丹蒌组,每组8只。正常组ApoE~(-/-)小鼠喂饲基础饲料12周,余各组均采用高糖高脂饲料连续喂饲12周制备AS模型。正常组不予灌胃干预,模型组、他汀组及丹蒌组于第5周时分别给予生理盐水、阿托伐他汀片混悬液(1.5 mg/mL)、丹蒌片混悬液(0.34 g/mL)连续灌胃干预8周。干预结束后,ELISA检测血清抵抗素水平,免疫组化染色观察主动脉细胞增殖核抗原(PCNA)阳性表达,透射电镜观察VSMC表型改变,Real-time PCR、Western Blot检测ApoE~(-/-)小鼠主动脉ERK1、ERK2 mRNA和ERK1/2、pERK1/2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组血清抵抗素水平升高(P0.05),PCNA阳性表达增加(P0.01),血管内ERK1、ERK2 mRNA和ERK1/2、pERK1/2蛋白表达上升(P0.01,P0.05),透射电镜下可见主动脉VSMC胞浆内肌丝减少,粗面内质网、线粒体等细胞器增多,有较多的吞噬大量脂质形成的空泡,呈典型合成型改变。与模型组比较,他汀组与丹蒌组血清抵抗素水平降低(P0.05),PCNA阳性表达减少(P0.01),血管内ERK1、ERK2 mRNA和ERK1/2、pERK1/2蛋白表达下降(P0.05,P0.01),透射电镜下主动脉合成型VSMC明显减少。结论丹蒌片可明显抑制VSMC异常增殖,其作用机制可能是通过降低血清抵抗素水平,抑制抵抗素对ERK信号通路的激活,减缓VSMC的增殖效应,从而达到抗VSMC增殖作用。     

益心化浊方对慢性心力衰竭大鼠肠道TLR4/Treg信号通路的影响

目的?探讨益心化浊方对慢性心力衰竭大鼠肠道TLR4/Treg信号通路的影响。方法? 采用左冠状动脉结扎术制备心肌梗死后心力衰竭大鼠模型，将造模成功的28只大鼠随机分为模型组、中药高剂量组（含药量9.58 mg/mL）、中药中剂量组（含药量4.79 mg/mL）、中药低剂量组（含药量2.40 mg/mL），每组7只，另设假手术组7只。中药各剂量组灌胃给药，假手术组和模型组给予等量生理盐水。干预4周后，观察各组动物心脏彩超指数、心肌及肠道组织病理变化。应用免疫组织化学技术和Western Blot 检测Toll样受体4（TLR4）、髓样分化因子88（Myd88）、TIR 结构域接头分子（Trif）、核因子κB（NF-κB）、叉头框蛋白P3（Foxp3）在肠道组织的表达，ELISA法检测血清中脂多糖（LPS）和IL-2 含量。结果?与假手术组比较，模型组左室收缩末内径（LVIDs）、左室舒张末内径（LVIDd）、绒毛高度/隐窝深度值（VH/CD）、LPS、NF-κB、MyD88及TLR4水平升高（P<0.01，P<0.05）；左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）、VH、CD及Foxp3水平降低（P<0.01，P<0.05）。与模型组比较，中药高、低剂量组LVEF增高，低剂量组LVFS升高（P<0.01，P<0.05），中药中剂量组LPS含量降低（P<0.05）；中药各组VH、CD值增高（P<0.01），VH/CD降低（P<0.01，P<0.05）；中药高剂量组Foxp3表达上调（P<0.05），中药中、高剂量组TLR4表达下调（P<0.05，P<0.01），中药高剂量组NF-κB、Trif及低剂量组MyD88表达下调（P<0.05）。结论?益心化浊方具有通过心-肠轴改善心力衰竭的多靶点效应，其作用与该方调控肠道TLR4/Treg信号通路相关。     

丹蒌片抗痰瘀互结型动脉粥样硬化大鼠炎症反应及机制

目的观察丹蒌片对痰瘀互结型动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠炎症因子以及脂蛋白相关磷脂酶A2(lipoprotein-associated phospholipase A2,LP-PLA2)和分泌型磷脂酶A2(secretory phospholipase A2,s PLA2)表达的影响,分析其可能机制。方法 40只雄性Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、西药组、丹蒌低剂量组(低剂量组)、丹蒌高剂量组(高剂量组),每组8只。正常组大鼠喂食基础饲料12周,余4组均采用高糖高脂饮食联合维生素D3腹腔注射复制大鼠痰瘀互结型AS模型。模型组、西药组、低剂量组、高剂量组分别给予生理盐水、阿托伐他汀钙混悬液[1.8 mg/(kg·d)]、丹蒌片低剂量[450 mg/(kg·d)]、高剂量混悬液[900 mg/(kg·d)]灌胃干预8周。观察大鼠一般情况。灌胃结束后,处死大鼠取血清,检测大鼠血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、IL-6、TNF-α、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)、氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)、LP-PLA2、s PLA2,HE染色观察大鼠胸主动脉病理学改变,Western blot和荧光定量PCR法分别检测大鼠胸主动脉内LP-PLA2、s PLA2蛋白及mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠精神萎靡,反应迟钝,胸主动脉可见典型的AS斑块,血清TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、MCP-1、ox-LDL、LP-PLA2、s PLA2水平升高(P0.05),胸主动脉LP-PLA2、s PLA2蛋白及mRNA表达升高(P0.05)。干预8周后,3个给药组大鼠均变活跃,胸主动脉HE染色见斑块消退。与模型组比较,3个给药组TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、MCP-1、ox-LDL、LP-PLA2水平降低(P0.01,P0.05),西药组血清s PLA2水平降低,大鼠胸主动脉LP-PLA2、s PLA2蛋白及mRNA表达降低(P0.01,P0.05);低剂量组胸主动脉LPPLA2蛋白及mRNA表达降低(P0.01,P0.05);高剂量组胸主动脉LP-PLA2、s PLA2蛋白及mRNA表达降低(P0.01,P0.05)。结论丹蒌片可能通过抑制LP-PLA2的表达,减少ox-LDL生成,从而发挥其抗炎、抗AS的作用。     

丹蒌片与血府逐瘀颗粒对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块影响的比较研究

目的比较丹蒌片与血府逐瘀颗粒对ApoE基因敲除（ApoE-/-）小鼠动脉粥样硬化（AS）斑块的影响。方法40只雄性ApoE-/-小鼠随机分为正常组、模型组、他汀组、丹蒌组和血府组，每组8只。正常组ApoE-/-小鼠喂食基础饲料12周，余各组均采用高糖高脂饮食制备AS模型。模型组、他汀组、丹蒌组、血府组分别给予生理盐水、阿托伐他汀片混悬液（1.5mg/mL）、丹蒌片混悬液（0.34g/mL）、血府逐瘀颗粒混悬液（0.64g/mL）灌胃干预8周。干预结束后，ELISA检测各组血脂、ox-LDL、内皮素（ET-1）、IL-6及TNF-α含量；油红“O”染色观察主动脉内膜斑块；HE染色观察主动脉病理形态学改变，并计算内膜厚度及斑块面积；透射电镜观察主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）超微结构改变。结果与正常组比较，模型组血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、ET-1、IL-6和TNF-α水平升高（P<0.01，P<0.05），HDL-C水平下降（P<0.05），油红“O”染色AS区域脂肪呈鲜红色，形成广泛而典型的AS成熟斑块，HE染色内膜增厚，斑块面积增大，透射电镜下可见VSMC胞浆内肌丝减少，粗面内质网、线粒体等细胞器增多，有较多脂滴形成，呈典型合成型改变；与模型组比较，他汀组和丹蒌组血清TC、TG、LDL-C、ox-LDL、ET-1和IL-6水平下降（P<0.05，P<0.01），HDL-C水平升高（P<0.05），TNF-α有下降趋势，但差异无统计学意义（P>0.05），血府组TC、TG、ox-LDL、ET-1和IL-6水平下降（P<0.05，P<0.01），LDL-C、TNF-α下降及HDL-C升高差异无统计学意义（P>0.05）。油红“O”染色可见各给药组主动脉亦有呈鲜红色的AS斑块，但AS脂肪区域面积明显减小，HE染色可见内膜增厚及斑块面积明显减小，透射电镜下可见各给药组中膜合成型VSMC较模型组明显减少。结论丹蒌片和血府逐瘀颗粒均可降低AS模型ApoE-/-小鼠炎症因子的表达及稳定AS斑块，但丹蒌片调节血脂代谢异常的作用优于血府逐瘀颗粒。     

益心化浊方对慢性心力衰竭大鼠肠道菌群结构与功能的影响

目的 探讨益心化浊方对慢性心力衰竭大鼠肠道菌群结构与功能的作用。方法 采用左冠状动脉结扎术建立慢性心力衰竭模型，将造模成功的14只大鼠随机分为模型、益心化浊方组，每组7只，另设7只SD大鼠为假手术组，只穿线不结扎。益心化浊方组给予益心化浊方2.40 mg/mL灌胃，假手术组和模型组动物给予等量生理盐水灌胃，干预4周。采用16S rRNA基因测序技术测定大鼠肠道细菌，应用Alpha、LEf Se、PLS-DA对数据进行分析，并将基因序列在KEGG功能谱数据库中进行功能预测。结果 与模型组比较，益心化浊方组乳杆菌目、气球菌科、乳酸菌科、草酸杆菌科、假单胞菌科、假单胞菌属、贪铜菌属、沙雷氏菌属、费克蓝姆氏菌属上调（P<0.05），梭杆菌门、梭杆菌纲、腐生螺旋菌纲、梭杆菌目、腐螺旋菌目、噬几丁质杆菌属、克里斯滕森菌科、明串珠菌科、孪生菌科、沉积物杆状菌属、02d06菌、拟无枝酸菌下调（P<0.05）。益心化浊方组富集于分节丝状菌属。在代谢层面上益心化浊方组与异源生物降解和代谢、核苷酸代谢、萜类和聚酮类代谢、氨基酸代谢、辅因子和维生素代谢、脂质代谢、聚糖生物合成和代谢关联；在细胞功能...